. Поэтому клетки эмбриональных и опухолевых тканей значительно легче культивировать вне организма, чем нормальные клетки взрослых животных.
Культуры ежедневно просматривают под малым увеличением микроскопа для определения характера их роста. Если клетки не пролиферируют, выглядят округлыми, зернистыми, темными и отслаиваются от стекла, значит посуда плохо обработана или токсичны ингредиенты питательной среды.
Наряду с первично-трипсинизированными тканями для культивирования вирусов широко используют культуры перевиваемых клеток, т. е. культуры клеток, способных к размножению вне организма неопределенно длительное время. Наиболее часто применяют культуры клеток, полученные из нормальных и раковых тканей человека. Широкую известность приобрели линия клеток HeLa, полученная из опухоли шейки матки, Нер-2 – из карциономы гортани, КВ – из ткани рака полости рта. Готовят также культуры клеток и из нормальных тканей животных – почки обезьяны, кролика и эмбриона свиньи (табл. 6).
Для пересева перевиваемых клеток питательную среду отсасывают пипеткой и выливают. Сформировавшийся тонкий слой разрушают раствором трипсина, и освобожденные таким образом клетки переносят в новый сосуд со свежим питательным раствором, где вновь образуется монослой клеток.
Индикатором наличия вируса в зараженных культурах клеток могут служить: а) развитие специфической дегенерации клеток; б) обнаружение внутриклеточных включений; в) обнаружение специфического антигена методом иммунофлюоресценции; г) положительная реакция гемадсорбции; д) положительная реакция гемагглютинации; е) образование бляшек.
Рис. 30. Внутриклеточные включения вируса в культуре клеток – тельца Гуарниери (по: Бургасов П. Н. и Николаевский Г. Р., 1972)
Для выявления специфической дегенерации в зараженных культурах клетки ежедневно просматривают под малым увеличением микроскопа. Многие вирусы при размножении в клетках вызывают их дегенерацию, т. е. оказывают цитопатическое действие (ЦПД).
Время развития и характер цитопатических изменений в инфицированных культурах клеток определяются свойствами и дозой инокулированного вируса, а также свойствами и условиями культивирования клеток. Одни вирусы (оспы, полиомиелита, Коксаки В и др.) вызывают ЦПД в пределах первой недели после заражения, другие (аденовирусы, парагриппозные вирусы, ЕСНО и др.) – спустя 1 – 2 нед. после заражения.