А) Определение воздействия зубных паст на физиологическую аутофлору полости рта экспериментальных животных
Для данных исследований используют белых лабораторных крыс. После 10-дневного карантина животных группируют по 10—15 особей в соответствии с задачами эксперимента. Оптимальное количество групп животных:
I группа – чистый контроль (не применяют никаких манипуляций и средств),
II группа – контроль (чистка зубов щеткой или ватным тампоном без использования лекарственных средств),
III группа – контроль (использование плацебо-средства),
IV группа – опытная.
Возможно сокращение количества контрольных групп до 2. Бактериологический материал со слизистой оболочки полости рта (спинка языка, щека, твердое небо) забирают стерильными дисками из фильтровальной бумаги (диаметр 3,0—3,25 мм) утром до кормления животных. Зубоврачебным пинцетом диск плотно фиксируют до полного смачивания ротовой жидкостью (приблизительно 4,0—5,0 с). Зубной налет снимают с помощью зубоврачебного экскаватора до наполнения вогнутой рабочей части инструмента. Бактериологический материал, собранный бумажными дисками, и зубной налет тщательно гомогенизируют: диски растирают в фарфоровых ступах с небольшим количеством физиологического раствора и помещают в стерильные пробирки с 5 мл физиологического раствора; зубной налет в 5 мл физиологического раствора суспендируют в аппарате для встряхивания биологических жидкостей. Бактериальные суспензии по 0,1 мл высевают на твердые дифференциально-диагностические питательные среды и распределяют по поверхности среды стеклянным шпателем. В качестве дифференциально-диагностических сред используют агар с 5% дефибринированной кровью кролика, желточно-солевую среду по Чистовичу, среды Эндо, Сабуро, томатно-молочный агар и M.S.A. «Difco».
Посевы на M.S.A. «Difco» и томатно-молочном агаре инкубируют при 37°С от 48 до 72 часов в анаэробных условиях, на агаре с кровью, желточно-солевым и Эндо – 24 часа в аэробных условиях. На агаре Сабуро посевы инкубируют до 5 суток при 22—24°С. Проводят подсчет колоний и предварительную идентификацию полученных штаммов микроорганизмов по культуральным и морфологическим признакам. Для специальных исследований выделяют чистые штаммы микроорганизмов и проводят дальнейшее изучение качественной характеристики микробных видов.