Методы голографической интерферометрии и лазерной микроскопии лишены описанных недостатков и позволяют исследовать живые клетки, анализировать форму эритроцитов по их поперечному сечению /Evans, Fang, 1972 /, производить количественную оценку формы /Reevs e a, 1978/, измерять объем и площадь поверхности эритроцитов, определять концентрации внутриклеточных веществ /Evans, Leblond, 1973/. Новые цитоморфометрические методы: голографическая интерферометрия и лазерная микроскопия позволяют проводить оценку состояния эритроцитов в динамике по таким важнейшим параметрам как форма и размеры, масса и концентрация плотных веществ в клетке. В настоящее время в Советском Союзе и за рубежом не имеется специальной голографической аппаратуры для исследования биомедицинских микрообъектов. В связи с вышеизложенным представляются актуальные цели и задачи данной работы.
Цели работы.
Целями работы являлись:
1. Выбор и реализация наиболее оптимальной схемы лазерного, голографического интерференционного микроскопа для анализа биологически1 микрообъектов, разработка количественных методик оценки размеров, формы, массы и концентрации гемоглобина в эритроцитах.
2. Проведение сравнительной характеристики свойств популяций эритроцитов в норме и патологии. Сопоставление полученных новыми методами результатов с известными данными. Количественный и качественный анализ основных преобразований формы и размеров эритроцитов в норме, при наследственных изменениях мембраны эритроцитов и при нарушениях состава плазмы.
Основные задачи исследования
1. Выбор и реализация наиболее оптимальной схемы лазерного, голографического интерференционного микроскопа для получения высококачественных интерферограмм и микрофотографий живых клеток малых размеров /51О мкм/.
2. Разработка количественных методик анализа эритроцитов на основе данных голографической интерферометрии и лазерной микроскопии по следующим параметрам: диаметр, максимальная и минимальная толщина, площадь поверхности, объем, коэффициент сферичности эритроцитов, масса и концентрация гемоглобина в клетках. Выработка количественных критериев оценки формы эритроцитов по их поперечному сечению.
З. Анализ свойств нефиксированных эритроцитов /на основе методик количественной и качественной оценки состояния клеток/ в норме, при нарушениях ионного состава плазмы /диффузный гломерулонефрит/, содержания глюкозы /сахарный диабет/ и при нарушениях свойств мембраны эритроцитов /наследственный микросфероцитоз/