В скором времени Помплий отправлен был от императора послом к персидскому царю. Корабль, на котором он плыл, потерпел крушение, и Помплий погиб. Теперь Анастасия, оставшаяся вдовой-девой, получила свое громадное наследство и полную свободу действий. Не видя теперь ни от кого препятствий, она предалась своему любимому делу служения узникам христианским и, помогая им своим имением, утешала их и возбуждала к мужественному терпению и святой смерти за Христа.
Император Диоклетиан, гонитель христиан, находился в то время в Верхней Италии, в Аквилее, близ Адриатического моря. Ему донесли из Рима, что темницы переполнены множеством христиан, и что нет возможности добиться у них отречения от Христа, так как всех их укрепляет учитель их Хрисогон. Царь приказал предать мукам и смерти всех христиан, а Хрисогона послать к нему. За Хрисогоном издали последовала и лучшая из учениц его – Анастасия. Царь склонял Хрисогона отречься от Христа, но он бесстрашно исповедал Распятого и выставил всю ложь языческих богов, приведя царю и слова Сократа: «Нужно всячески удаляться от них, потому что они соблазняют людей и суть известные душегубцы».
Хрисогон был усечен мечом в пустынном месте, а тело его брошено на берегу моря. Неподалеку стоял домик одного благочестивого пресвитера Зоила и трех девиц сестер: Агапии, Хионии и Ирины. Этот пресвитер, извещенный Богом о казни мученика, скрыл у себя его тело, а через месяц после казни святой Хрисогон явился ему и сказал, что вскоре три девы, дочери его, будут взяты на муку, и повелел, чтобы он просил рабу Господню Анастасию подкреплять дух мучениц; о том же было сообщено чудным образом и самой Анастасии. Она отыскала пресвитера и просила его познакомить ее с тремя девами. Целую ночь пробеседовала она с ними о любви к Богу и о спасении души и увещевала их бесстрашно стоять до конца за их Небесного Жениха. В доме Зоила, в особом ковчеге, увидела она мощи своего учителя Хрисогона и много плакала над ними теплыми слезами, поручая себя его молитвам; потом она вернулась в Аквилею.
Вскоре пресвитер Зоил блаженно почил, а девы были приведены на допрос к Диоклетиану и, по отказе признать идолов, заключены в темницу. После разных пыток Агапий и Хиония были сожжены, а Ирина убита из тугого лука.
Анастасия взяла их тела, повила белыми плащаницами, оросила ароматами и с благоговением положила на избранном месте.