Диссимметрия биомолекул и продолжительность жизни. Влияние диссиметроторов и Биотронов ЕКОМ на жизнеспособность нематод Caenorhabditis elegans - страница 6

Предварительно формировалась линия нематод для посева взрослых одиночных нематод в чашки Петри.

Оценивали выживаемость нематод при обработке диссимметратором по сравнению с контролем.

Проведено четыре эксперимента с этой целью.

Методы

Посев одиночных нематод произведен 26.9.2023 в 14 пластмассовых чашек Петри диаметром 35 мм фирмы «Nunclon» с 3 кольцами ПВХ с внутренним диаметром 14 мм и с толщиной стенок 2 мм. Чашки стояли при температуре 22—23 °С в стерильном ламинарном шкафу при посеве. Первоначальный высев нематод производили из подготовленного пула нематод с определенной продолжительностью жизни 5 суток по 1—3 нематоды в одно кольцо. Возраст нематод на начало действия диссимметратора 6 сут. После первоначального посева нематод чашки с нематодами заворачивали в 2 полиэтиленовых пакета и условно герметизировали путем скручивания концов пакетов с целью предотвращения высыхания агаровой подложки и сохранения стерильности в чашках Петри вне ламинарного шкафа. Затем чашки помещали в холодильник на несколько часов при 5—7 °С. После этого чашки извлекли, сосчитали число нематод в каждом кольце каждой чашки с помощью микроскопа (Рис. 2) и сформировали соответствующие группы по 7 чашек и 38 нематод в группе. Частичное содержание нематод при пониженной температуре позволяет получить более пологую кривую выживания и лучше выявить особенности действия того или иного фактора на жизненные характеристики нематод. Для эксперимента чашки извлекали из холодильника, 7 опытных чашек ставили на диссимметратор (Рис. 3), а контрольные 7 чашек размещали на расстоянии 3.5 м от него.

После проведения обработки опытных чашек все 2 группы чашек помещали обратно в холодильник при 5—7 °С.

Далее ежедневно чашки вынимали из холодильника, переносили в стерильный ламинарный шкаф, где с помощью микроскопа производили подсчет оставшихся живых нематод и добавление, при необходимости, воды для предотвращения высыхания агаровой подложки. Затем проводили экспериментальную обработку нематод на диссимметраторе, а после этого возвращали в холодильник.

В течение экспериментов подбирали время облучения нематод диссимметратором от 1 до 24 ч, чтобы установить оптимальную величину и максимально допустимое значение.

Результаты

Результаты показаны на рис. 5, 6 и в таблицах 1, 2. На рис. 5 видно, что кривая выживаемости нематод при обработке их диссимметратором Кутушова лежит выше, чем кривая выживаемости контрольных нематод, не подвергшихся такому же воздействию.