1558
–– Сторонником завоевания Флориды оставался Луис де Веласко, вице-король Новой Испании, который считал, что овладение полуостровом обезопасит испанские колонии с севера. 30 октября он отправил в экспедицию Тристана де Луна-и-Арельяно, который высадился в районе залива Мобил, где основал поселение Santa María de Ochuse (Пенсакола), но не смог обнаружить никакой провизии, а затем шторм повредил его корабли.
1559
–– Флотилия из 13 судов, на которых находились 500 солдат и 1000 колонистов, летом под командованием Тристана де Луны прибыла в залив Пенсакола и основала поселение Пуэрто-де-Санта-Мария. Он отправил одно судно назад в Веракрус с сообщением об удачной высадке, два судна в Испанию, и стал ждать возвращения поисковых партий, при этом большинство припасов экспедиции оставалось на стоящих в заливе судах. Поисковые партии вернулись через три недели, обнаружив лишь один индейский город. Прежде, чем суда были разгружены, в ночь на 19 сентября налетел ураган, вызваший штормовой прилив и уничтоживший большинство судов экспедиции со всеми припасами. После этого большинство людей поднялось вверх по реке Алабама, где заняли пустую деревню Нанипакана и переименовали её в Санта-Крус. В ноябре вице-король прислал два судна с помощью, пообещав отправить дополнительную помощь весной. Эти суда помогли колонии пережить зиму, однако обещанная помощь прибыла лишь в сентябре. Тристан де Луна приказал остаткам своих сил двинуться на индейский город Кока, однако те взбунтовались. Имевшимся в поселении миссионерам удалось предотвратить кровопролитие, однако вскоре в поселение прибыл Анхель де Вильяфанье, и предложил увезти всех, кто разочаровался в успехе предприятия и желает покинуть эти места. Тристан де Луна смягчился и согласился вернуться в Мексику.
1564
-– лето – Колиньи отправил экспедицию, под командованием Рене Гулен де Лодоньера, который достиг Флориды 22 июня, а 25 июня основал форт Каролина на территории нынешнего Джексонвилла. Однако очень скоро стала ощущаться нехватка продовольствия, начались протесты и мятежи, а сам Лодоньер стал болеть и терять интерес к колонии.
1565
–– Появление французов встревожило испанского короля, который, если и имел планы покинуть Флориду, то теперь быстро от этого отказался. По его распоряжению Педро Менендес де Авилес собрал большой флот из 19 кораблей, который 20 июня покинул Кадис, задержался на Канарских островах из-за штормов, и 28 августа, в день Святого Августина, достиг берегов Флориды, 8 сентября высадил экипажи на берег в устье реки, названной им рекой Святого Августина, и объявил Флориду собственностью испанского короля. Этот день считается днём зарождения города Сан-Агустин (нынешнего Сент-Огастина). Уже 10 сентября французские корабли подошли к месту высадки испанцев, но внезапный шторм уничтожил их. Менендес по суше отправился к форту Каролина и быстро захватил его, переименовав в Форт-Матео. Уцелевшие французы построили укрепление на мысе Канаверал, но Менендес обнаружил их, взял в плен и отправил в Гавану.